运用蛋白组学方法筛选鉴别星形细胞瘤与少突胶质细胞瘤的蛋白标志物

【摘要】第一部分绪论本节旨在介绍相关研究背景,并对蛋白组学方法在神经外科疾病研究中的应用进行了回顾。第二部分运用蛋白组学方法筛选鉴别星形细胞瘤和少突胶质细胞瘤的蛋白标志物：对星形细胞瘤和少突胶瘤的蛋白质组进行对比分析；验证谷氨酰胺合成酶在各个级别星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤和少突星形细胞瘤中的表达；以及探究星形胶质细胞分化过程中谷氨酰胺合成酶的表达。背景与目的星形细胞瘤和少突胶质细胞瘤是中枢神经系统原发肿瘤中两种常见的类型,但因为形态学上的多样性、混合性少突胶质细胞瘤的存在以及缺乏特异性蛋白标志物等因素影响,尤其是当两者混合存在时,单纯依靠显微镜下形态学鉴别有一定难度。如果能找到这两种不同肿瘤所表达的特异性蛋白标志物,则有可能从免疫组织化学及分子生物学的角度解决这两种肿瘤的鉴别问题。本研究的目的就是为了阐明星形细胞瘤和少突胶质细胞瘤所表达的不同的蛋白并探究可靠的可用于对二者进行鉴别诊断的蛋白标志物。材料与方法运用选择性组织显微切割、双向电泳技术及计算机图像分析对星形细胞瘤和少突胶质细胞瘤的蛋白组进行分析检测,并通过高效液相色谱技术及串联质谱分析对两者所表达的不同蛋白进行鉴定。谷氨酰胺合成酶(glutamingsynthetase,GS)作为可能对有助于星形细胞瘤和少突胶质细胞瘤鉴别的候选蛋白标志物,对其在不同级别星形细胞瘤、少突星形细胞瘤及少突胶质细胞瘤的表达通过蛋白印迹法(Westernblot)及免疫组化(immunohistochemistry,IHC)等方法进行了检测。为了探究谷氨酰胺合成酶在胶质细胞分化过程中的作用,用双丁酰环腺甘酸(dibutryl-cyclicadenosinemonophosphate,dbcAMP)对未分化的小鼠星形胶质细胞进行处理,并对处理前后的谷氨酰胺合成酶和胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)的表达进行了检测。结果双向电泳技术及计算机分析显示星形细胞瘤和少突胶质细胞瘤共有七种表达不同的蛋白,谷氨酰胺合成酶是其中之一。Westernblot和免疫组化证实谷氨酰胺合成酶在星形细胞瘤中的表达多于在少突胶质细胞瘤中的表达。免疫组化证实在所有级别的星形细胞瘤(WHOⅡ-Ⅳ级各5个,共15个)和少突星形细胞瘤(WHOⅡ-Ⅲ级各2个)中谷氨酰胺合成酶均有表达,而在少突胶质细胞瘤中的表达仅有6%(1/16,Ⅱ级13个,Ⅲ级3个)。双丁酰环腺甘酸处理鼠未分化星形胶质细胞可促进胶质细胞的分化,并伴有胶质纤维酸性蛋白和谷氨酰胺合成酶表达水平的上调。结论(1)星形细胞瘤和少突胶质细胞瘤共有7种表达不同的蛋白；(2)谷氨酰胺合成酶的表达可用于鉴别星形细胞瘤和少突胶质细胞瘤；以及(3)谷氨酰胺合成酶可能在星形细胞分化及星形细胞瘤的发生过程中可能有一定的作用。
【作者】齐猛；
【导师】史继新；庄正平；
【作者基本信息】南京大学，外科学，2011，博士
【关键词】少突胶质细胞瘤；星形细胞瘤；蛋白组学；谷氨酰胺合成酶；双向电泳；质谱分析；

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